La citometría de flujo es una técnica de análisis celular que implica medir las características de dispersión de luz y fluorescencia que poseen las células conforme se las hace pasar a través de un rayo de luz. La citometría de flujo se emplea en el recuento y clasificación de células según sus características morfológicas, presencia de biomarcadores, y en la ingeniería de proteínas. En los citómetros de flujo, las células suspendidas en un fluido atraviesan un finísimo tubo transparente sobre el que incide un delgado rayo de luz láser, la luz transmitida y dispersada por el pasaje de las células a través del tubo se recoge por medio de unos dispositivos de detección, permitiendo hacer inferencias en cuanto a tamaño y complejidad de las células. El uso de moléculas fluorescentes permite analizar la presencia de varios marcadores de manera simultánea. Los conocidos como separadores o “sorters” pueden también purificar poblaciones de características determinadas en distintas fracciones finales a la vez que realizan el conteo del número de células presentes en la muestra.
El objetivo de esta unidad es:
- Ofrecer acceso a equipos especializados en citometría de flujo y separación celular a investigadores del INiBICA y usuarios externos, proporcionando experiencia técnica y capacitación.
- Ofrecer apoyo técnico y asesoramiento a los grupos de investigación del centro o a investigadores visitantes en el diseño de experimentos, selección de marcadores, adquisición de muestras y análisis de poblaciones celulares y discusión de los resultados obtenidos.
- Aislamiento de poblaciones celulares mediante tecnología de “Cell Sorting”.
- Desarrollo de nuevas tecnologías y evaluación de nuevos equipos.
- Formación en esta tecnología para usuarios.
- U.I.H.U.P.M:
- Citómetro, FACSCelesta (Becton Dickinson).
- Separador celular, FACSMelody (Becton Dickinson).
- Citómetro, FACSCalibur (Becton Dickinson): equipado con dos Láseres (Láser, refrigerado por aire, de Argón de 15mw, opera a 488nm y Láser diodo 635nm). Puede medir simultáneamente 6 parámetros, Forward Scatter, Side Scatter y 4 fluorescencias.
- Separador celular magnético, autoMACS Pro SEPARATOR (Miltenyi Biotec).
- Cabina de flujo laminar MHD 50546/1.
- SC-IBM UCA:
- Citómetro de flujo Analítico Cytoflex S.Software CytoExpert Beckman Coulter.
- Citómetro de Flujo preparativo Sorter MoFlo Astrios EQ Beckman Coulter en cabina SterilGad.
- Campanas de flujo laminar Heraeus Lamin Air HB2448.
- Equipo informático Fujitsu con software de análisis Kaluza de Beckman Coulter para datos de citometría de flujo.
- Equipo para refrigerar muestras del sorter Thermo A28.
Existe una amplia gama de aplicaciones de citometría de flujo, que incluyen, entre otras:
- Análisis multicolor de la superficie celular y antígenos intracelulares (inmunofenotipaje).
- Cuantificación de poblaciones celulares de diferentes tejidos biológicos.
- Estado funcional de la célula: medidas de viabilidad, apoptosis, necrosis.
- Análisis de contenido de ADN y ciclo celular.
- Análisis funcional, como la proliferación celular (CFSE), flujo de calcio, pH intracelular, producción de ROS.
- Análisis de expresión génica mediante el uso de genes informadores.
- Análisis de microvesículas.
- Análisis de microorganismos.
- Separación de poblaciones celulares mediante citometría de flujo (cell sorting).
- Uso (sin técnico) de analizadores de citometría de flujo (solo para usuarios internos debidamente capacitados en el uso del equipo).
- Uso (con técnico) según necesidad del investigador.
- Sorting (sólo se puede hacer uso de este servicio asistido por técnico).
- Procesamiento y análisis de imágenes. Análisis de datos de citometría de flujo.
- Asesoramiento y apoyo en diseño experimental, métodos de preparación de muestras, interpretación y presentación de datos.
- Desarrollar / implementar nuevas aplicaciones / técnicas de citometría de flujo que respondan a las necesidades del usuario.
- SC-IBM UCA: dg.recursoscientificos@uca.es.
- U.I.H.U.P.M: gema.jimenez.g.sspa@juntadeandalucia.es.
